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      (工作日9:00-18:00)
      True
      DNA轉染試劑(效果同2000) DNA轉染試劑(效果同2000)

      DNA轉染試劑(效果同2000)

      產品編號:sc401
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      產品概述
          本產品是一種具有高效轉染、低毒性的陽離子聚合物核酸轉染試劑,適用于大多數的真核細胞,可以用于原代細胞和懸浮細胞體外轉染。本品為經過優化的納米材料,它不僅改善了轉染試劑存在細胞毒性的問題,對于大多數細胞,轉染72小時后不更換培養基無明顯毒性;同時在血清存在的條件下,也能達到高效的轉染效果。



      操作步驟
      (以24孔板為例,如使用其它規格培養板/皿,請參照轉染試劑建議使用劑量標準進行調整。為了獲得最佳轉染效果,請根據實驗優化使用劑量
      1. 接種細胞
      貼壁細胞:轉染前一天,接種適量細胞(0.5 ~ 2×105)接種至500 μl不含抗生素的培養基中,使轉染時細胞密度達到70 ~ 80%匯合度。
      懸浮細胞:轉染前,接種4~ 8×105個/孔于500 μl不含抗生素的培養基中。
      1. 轉染復合物配制(以24孔板每孔用量為參考)
      1. 取0.8 μg質粒DNA稀釋于50 μl無血清培養基中,輕輕吹吸混勻;
      2. 取2 μl轉染試劑稀釋于50 μl無血清培養基中,充分混勻,室溫條件下孵育5分鐘;
      3. 將a和b稀釋的質粒和轉染試劑混合,充分混勻(可渦旋振蕩),室溫條件下孵育20分鐘;
      1. 轉染細胞:將孵育20分鐘后的轉染復合物以100 μl/孔加入24孔板的細胞中,輕輕搖勻。
      2. 將細胞置于培養箱中培養18 ~ 48小時后檢測細胞轉染結果,此過程中可以不更換含轉染復合物的培養基(對于敏感細胞建議在4 ~ 6小時后更換培養基)。
       
      儲存條件
      4℃保存,1年有效;-20℃保存,2年以上有效;反復凍融不影響試劑的質量。
      僅供科學研究使用

      優化轉染
          為了獲得最佳的轉染效果,降低其它因素的影響,需要根據具體實驗情況,調整細胞接種密度、轉染試劑/質粒DNA劑量來優化轉染條件。敏感細胞可適當提高接種密度,確保細胞維持較高的增殖能力;轉染試劑/質粒DNA劑量比例可在1:1至1:5之間調整。
       
      轉染試劑建議使用劑量
       
      培養容器 細胞接種體積(ml) DNA用量(μg) 轉染試劑用量(μl) 稀釋體積(μl)
      96孔板 0.1 0.2 0.5 25
      24孔板 0.5 0.8 2.0 50
      12孔板 1 1.6 1.0 100
      6孔板 2 4.0 10 250
      6 cm 5 8.0 20 500
      10cm 15 24 60 1500
       
      (為了獲得最佳轉染效果,請根據實驗優化使用劑量)
       
      注意事項
      1. 轉染前必須確保細胞處于良好的生長狀態;
      2. 為避免細胞出現死亡,培養基中盡量不要添加抗生素;
      3. 使用高純度的質粒確保高效的轉染效率;
      4. 使用前充分搖勻轉染試劑(或渦旋振蕩),使轉染試劑分布均勻;
      5. 質粒和轉染試劑稀釋時,請使用無血清無抗生素的培養基(有條件可以使用Opti-MEM低血清培養基);

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