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      400-8888-461

      (工作日9:00-18:00)
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      CCK-8 CCK-8

      CCK-8

      產品編號:SC504
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             CCK-8
      Cell Count Kit-8)是一種利用WST-82-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)快速檢測細胞增殖或毒性試驗的方法。WST-8是一種類似MTT的四唑鹽,在電子載體的存在下,被活細胞內的脫氫酶還原生成水溶性的橙黃色Formazan(甲),通過比色法檢測甲臜生成量來反映試驗中活細胞的數量。



      操作方法:
      1. 標準曲線制作
        a. 接種細胞:接種不同細胞密度梯度的細胞至96孔板(建議設5 ~ 8個梯度),每孔100 μl,每組設置3~5個復孔,置于37℃,5% CO2培養箱;
        b. CCK-8孵育:接種4 h后,待細胞完全貼壁,在每孔中加入10 μl的CCK-8試劑,輕輕混勻,并將培養板置于37℃,5% CO2培養箱中孵育1~4 h;
        c. 上機檢測:將孵育后的細胞培養板置于酶標儀上,在450 nm處檢測其吸光值;
        d. 制作標曲:制作以細胞數量為橫坐標,OD值為縱坐標的標準曲線,參照標準曲線可以計算出樣品組的細胞數量;
       
      2. 細胞毒性檢測
        a. 接種細胞:接種對數期的細胞至96孔板,密度約1~5×103個/孔,每孔100 μl,每組設置3~5個復孔,置于37℃,5% CO2培養箱;
        b. 樣品處理:待細胞貼壁后,加入不用濃度的藥物或樣品處理細胞,然后置于培養箱中孵育一定的時間(如:24 h、48 h、72 h);
        c. CCK-8孵育:每孔加入10 μl的CCK-8試劑,輕輕混勻,并將培養板置于37℃,5% CO2培養箱中孵育1~4 h;(可進行預實驗確定孵育時間);
        d. 上機檢測:將孵育后的細胞培養板置于酶標儀上,在450 nm處檢測其吸光值;


      .2. Hela細胞為例,細胞按1.25×103 ~ 20×103/孔的密度梯度接種至96孔板中,培養4 h后,待細胞完全貼壁,
      每孔加入
      10 μlCCK-8試劑,輕輕混勻,置于培養箱中孵育1 h后,在450 nm處檢測其吸光值,并制作標準曲線。

      注意事項:
      1. 接種對數期生長的細胞,注意使細胞分散均勻,確保每個復孔中的細胞數量一致,減少誤差。
      2. 為了達到最佳的實驗效果,建議先進行預實驗,確定最佳的細胞接種密度及CCK-8試劑孵育時間;以貼壁細胞為例,接種密度約1~5×103個/孔;孵育時間為1~4 h,多數細胞孵育約30 min即可觀察到明顯的顏色變化。
      3. 設置空白對照,在無細胞的培養基中加入CCK-8檢測,去除本底對吸光值的干擾。
      4. 如果OD值太高,建議降低細胞接種密度或減少CCK-8試劑孵育時間。
       
      儲存條件
      4℃保存,1年有效;-20℃保存,2年以上有效;
      僅供科學研究使用

       

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