CCK-8（Cell Count Kit-8）是一種利用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）快速檢測細胞增殖或毒性試驗的方法。WST-8是一種類似MTT的四唑鹽，在電子載體的存在下，被活細胞內的脫氫酶還原生成水溶性的橙黃色Formazan（甲臜），通過比色法檢測甲臜生成量來反映試驗中活細胞的數量。



操作方法：
1. 標準曲線制作
  a. 接種細胞：接種不同細胞密度梯度的細胞至96孔板（建議設5 ~ 8個梯度），每孔100 μl，每組設置3~5個復孔，置于37℃，5% CO₂培養箱；
  b. CCK-8孵育：接種4 h后，待細胞完全貼壁，在每孔中加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，并將培養板置于37℃，5% CO₂培養箱中孵育1~4 h；
  c. 上機檢測：將孵育后的細胞培養板置于酶標儀上，在450 nm處檢測其吸光值；
  d. 制作標曲：制作以細胞數量為橫坐標，OD值為縱坐標的標準曲線，參照標準曲線可以計算出樣品組的細胞數量；
 
2. 細胞毒性檢測
  a. 接種細胞：接種對數期的細胞至96孔板，密度約1~5×10³個/孔，每孔100 μl，每組設置3~5個復孔，置于37℃，5% CO₂培養箱；
  b. 樣品處理：待細胞貼壁后，加入不用濃度的藥物或樣品處理細胞，然后置于培養箱中孵育一定的時間（如：24 h、48 h、72 h）；
  c. CCK-8孵育：每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，并將培養板置于37℃，5% CO₂培養箱中孵育1~4 h；（可進行預實驗確定孵育時間）；
  d. 上機檢測：將孵育后的細胞培養板置于酶標儀上，在450 nm處檢測其吸光值；


圖.2. 以Hela細胞為例，細胞按1.25×10³ ~ 20×10³個/孔的密度梯度接種至96孔板中，培養4 h后，待細胞完全貼壁，
每孔加入10 μl的CCK-8試劑，輕輕混勻，置于培養箱中孵育1 h后，在450 nm處檢測其吸光值，并制作標準曲線。

注意事項：
1. 接種對數期生長的細胞，注意使細胞分散均勻，確保每個復孔中的細胞數量一致，減少誤差。
2. 為了達到最佳的實驗效果，建議先進行預實驗，確定最佳的細胞接種密度及CCK-8試劑孵育時間；以貼壁細胞為例，接種密度約1~5×10³個/孔；孵育時間為1~4 h，多數細胞孵育約30 min即可觀察到明顯的顏色變化。
3. 設置空白對照，在無細胞的培養基中加入CCK-8檢測，去除本底對吸光值的干擾。
4. 如果OD值太高，建議降低細胞接種密度或減少CCK-8試劑孵育時間。
 
儲存條件
4℃保存，1年有效；-20℃保存，2年以上有效；
僅供科學研究使用