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      Xeno-Free人間充質干細胞培養基 Xeno-Free人間充質干細胞培養基

      Xeno-Free人間充質干細胞培養基

      產品編號:AC-1001003
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                        Xeno-Free 人間充質干細胞培養基

                                                                               Human Mesenchymal Stem Cell Meedium

      一、產品基本信息

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      二、產品簡介

      Xeno-Free 人間充質干細胞培養基一款無外源動物成分的 人間充質干細胞培養基??蓱糜谌斯撬?、脂肪、臍帶等組織來源的間充質干細胞的原代分離、擴增與傳 代培養,并保持其多向分化潛能。本產品內毒素水平遠低于中國藥典標準,生產過程遵循 ISO9001 體系, 并符合 GMP 指導原則。 Xeno-Free 人間充質干細胞培養基主要成分:氨基酸,維生素、無機鹽、白蛋白,轉鐵蛋白、胰島素、 微量元素,細胞因子等。

      三、產品特性

      ? 無外源動物蛋白成分,大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風險。

      ? 全程無血清生產,極大降低批次間差異。

      ? 可用于原代分離,且培養過程無需包被培養板。

      ? 擴增效率高,24h 左右增殖翻倍,節省培養時間。

      ? 內毒素<0.06EU/ml,遠低于中國藥典水平

      四、產品內容

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      五、相關產品

      無血清細胞凍存液(治療級)(Applied Cell?: Cat. no.AC-1001006

      人臍帶間充質干細胞(Applied Cell?: Cat. no.AC-2001003

      人脂肪間充質干細胞(Applied Cell?: Cat. no.AC-2001004

      細胞消化液(Applied Cell?: Cat. no. AC-1001024

      六、實驗準備 人間充質干細胞培養基配制

      1.1. 37℃快速解凍人間充質干細胞添加劑,快速溶解時不易破壞添加劑中營養物質,時間大致為 10min。待添加劑融化后搖勻,分裝或直接按比例添加到基礎培養基中,分裝后添加劑立即儲存 -20℃-80℃,避免反復凍融 。

      1.2. 將添加劑以 10%比例加入到人間充質干細胞基礎培養基,混勻,即為人間充質干細胞培養基 (AC-1001003)?;旌虾笈囵B基可在 2-8℃ 穩定儲存 2-3 周,不建議使用已配制超過 3 周的 培養基。

      1.3. 人間充質干細胞培養基可直接應用于人類骨髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質干細胞的原代分 離、擴增與傳代培養。

      七、操作方法(以下步驟皆應在無菌條件下操作) 1. hMSC 細胞復蘇(10cm dish)

      1.1. 從液氮中取出凍存的 hMSC 細胞,迅速將凍存管放入 37℃水浴快速融解。

      1.2. 在生物安全柜或超凈臺中,將解凍后的細胞懸液緩慢加入 5 mL 預溫的人間充質干細胞培養基 (AC-1001003)。

      1.3. 1200rpm 離心 3 min,吸掉上清,加入 10ml 人間充質干細胞培養基重懸細胞。

      1.4. 將細胞均勻鋪到培養皿中,水平十字振動培養皿使細胞均勻分布,5% CO237℃恒溫細胞培養 箱中培養 24 小時后觀察細胞狀態。

      1.5. 24h 后更換新鮮人間充質干細胞培養基繼續培養,每 2-3 天更換培養液。

      2. hMSC 細胞傳代培養

      2.1. 在顯微鏡下觀察細胞,當細胞融合度達到 90%,即可傳代。

      2.2. 在超凈臺/安全柜中,吸掉原有培養基,加入 PBS 溶液清洗一次,加入細胞消化液(AC-1001024) 使之完全覆蓋皿/瓶底。

      2.3. 室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-4 分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。

      2.4. 加入消化液 2 倍體積的人間充質干細胞培養基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞,并 輕輕吹打混勻,使細胞完全分散。

      2.5. 將細胞懸液轉移到 15 mL 離心管中,1200 rpm 離心 3 min。

      2.6. 棄上清,加入人間充質干細胞培養基,重懸細胞,計數。1:3-1:4 比例傳代,或按 1-2x104 cells/cm2 傳代,均勻鋪在培養皿/瓶中,置于 37℃,5%CO2 培養箱中培養。

      注意:細胞傳代所需的時間:2-4 天。5 代及之前的細胞,生長速度較快。5 代以后的細胞,生 長速度稍緩。

      3. hMSC 細胞凍存

      3.1. 細胞達到 90%匯合度, 吸掉原有培養基,PBS 清洗一次。

      3.2. 加入細胞消化液(AC-1001024)使之完全覆蓋皿/瓶底,室溫孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min 分鐘,顯微鏡下觀察大部分細胞脫離皿底即停止消化。

      3.3. 加入消化液 2 倍體積的人間充質干細胞培養基,用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完全脫離的細胞,并 輕輕吹打混勻,使細胞完全分散。

      3.4. 將細胞懸液轉移到 15 mL 離心管中,1200 rpm 離心 3 min,吸掉上清。

      3.5. 加入適量無血清細胞凍存液(治療級)(AC-1001006),調整細胞凍存密度在 1×106 cells/mL

      3.6. 左右,每支凍存管分裝 1.5-2ml。

      3.7. 直接放入-80℃,24h 后轉入液氮中長期保存。

      八、細胞形態圖

                                                        33.png

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      九、質量控制

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